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      檢測2019-nCoV?我有‘辣酶’!

      2020/3/23 14:29:35??????點擊:

      即將迎來2020年的春節,然而,一個冰冷的代號決意要在這節日期間印下越來越深的烙印。2019-nCoV,或者稱“2019新型冠狀病毒”正在引起一場來勢洶洶的肺炎疫情。


      根據官方公布的信息,2019-nCoV屬于冠狀病毒中的一種,其遺傳物質為正鏈ssRNA,基因組大小為30kb。該類病毒部分感染人,部分感染哺乳動物及鳥類。極少數情況下(如SARS、MERS)會從動物傳染到人群中,并且流通狀況復雜難以預測。截至目前,這種新型肺炎已被納入乙類傳染病、采取甲類管理措施。20日,國家衛健委發布動態,下發新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒,要求各地加強檢測,全力救治患者,及時發布確診病例及疫情防控信息。


      早期診斷是阻斷病毒傳播的關鍵。


      根據世衛組織(WHO)公布的第一版《針對疑似新型冠狀病毒感染造成嚴重急性呼吸道感染的臨床處置指南》,RT-PCR是對臨床樣本進行診斷的首選方式。同時建議對所有可疑病例進行詳細的微生物學研究,因為不排除與其他呼吸道病毒出現雙重感染的可能性。目前,病毒的相關基因組信息已經在genebank(MN908947)公開,同時WHO也發布了2019-nCoV的熒光定量PCR檢測指南供研究人員參考,無疑為當前診斷體系的建立奠定了堅實基礎。


      TOYOBO致力于為各試劑盒廠家提供高性能,高性價比的診斷試劑原料,協助客戶開發有競爭力的診斷產品。


      One-Step qRT-PCR探針法檢測試劑盒

      本試劑盒是使用了高效率逆轉錄酶ReverTra Ace和PCR酶Tth DNA Polymerase的兩酶體系一步法熒光定量PCR試劑盒。通過將兩種酶與最優化的buffer相組合,可以對微量RNA進行迅速定量。適用于對RNA病毒及低表達量mRNA的定量。同時,不易受目的基因序列的影響,可高靈敏度地檢測出各種RNA。

      貨號:QRZ-101


                        特征

      • 卓越的檢測效率和靈敏度

      • 特別適合多重(Multiplex)檢測體系

      • 完全兼容快速反應條件

      • 適用于高GC、難擴增的模板

      • 適用于粗提樣本檢測

      • 含有dUTP,可進行UNG防污染


      實驗例



      *1 縱軸RNA拷貝數為該病毒模板下能檢測的最低限,只有QRZ-101能在30 copy以下的模板量下得到一致的陽性結果

      *2 模板為human total RNA按10倍梯度稀釋,檢測β-actin基因的表達量

      *3 使用3種熒光染料標記的TaqMan探針,分別進行單重及三通道同時檢測,各基因檢測結果依次繪制標準曲線,在同一坐標系進行比較

      無論是各種病毒的最低檢測限還是檢測的熒光終值,QRZ-101都優于同類一步法試劑,并且在多重體系下具有和單重體系相同的檢測效果。



      高效率逆轉錄酶ReverTra Ace

      本產品是基于M-MLV改良的RNA逆轉錄酶,與野生型相比活性高出4倍。通過引入突變降低了酶本身的RNaseH活性,并且提高了高溫反應性,從而高效率進行cDNA合成。

      貨號:TRT-101


               特征

      • 去掉了RNaseH活性,延伸性能卓越

      • 優良的高溫反應性

      • 特別適用于RT-PCR


      實驗例


      以檢測Flu病毒為例,模板拷貝數從101~106數量級,THUNDERBIRD?Probe One-step qRT-PCR Kit按標準體系進行,T公司的逆轉錄酶從1U增加到 4U,定量效果依然到不到本試劑盒效果。



      熱啟動TTx DNA聚合酶(具逆轉錄活性)

      TTx DNA Polymerase是基于Tth酶改造的DNA聚合酶,相比 TaqDNA polymerase,對 GC-rich 目的片段及粗樣品的擴增效率更出色,具有延伸速度快、抵抗PCR抑制劑能力強,且在Mn2+存在時具有逆轉錄活性等特點。本產品添加了熱啟動抗體,實現了高特異性的PCR/RT-PCR,同時可兼容快速定量儀器。

      特征

      • 相比Taq酶PCR靈敏度高,抗抑制能力強

      • 不易受抑制物影響,可進行血液直擴

      • 快速反應條件

      • 有可用于凍干(無甘油)的版本


      實驗例



      左圖,使用TaqMan探針法檢測不同濃度流感病毒樣本。首先抽提RNA進行梯度稀釋(1x10^2 ~ 1x10^8),以相同條件檢測比較同類試劑盒檢測靈敏度。QRT為使用TTh酶的一步法定量試劑,可見HSTTX酶在處理實際樣本時效果最好。

      右圖,使用快速條件檢測不同拷貝數(2500, 625, 156, 40, 10)的腸病毒樣本。即使在10 copy的模板濃度下依然能獲得真陽性結果。



      重組型RNA酶抑制劑

      該RNA酶抑制劑產品來源于重組型人胎盤蛋白,通過非共價結合以1:1的比率使Rnases失活,特異地抑制RNase A, B, C以及人胎盤Rnase,不可抑制的核酸酶包括Rnase T1, S1 nuclease, Aspergillus來源的Rnase以及Rnase H。

      特征

      • 親和特異性與天然的Rnase抑制劑相同

      • 純度高且不含核酸酶

      • 可在較廣的pH范圍內具有活性(pH 5-8)

      實驗例



      通過qPCR比較不同公司RNA酶抑制劑的效果,從結果可知,使用TOYOBO RNA酶抑制劑時可得到更低的Ct值,效果與R公司相當。



      UNG酶

      本品為熱敏型(Heat-labile) UNG酶(Uracil-DNA Glycosylase),可以與dUTP聯合使用(QRZ-101中含有)去除qPCR檢測中從前序反應帶來的的carry-over污染,避免因污染導致的假陽性。該酶在55℃即可完全失活,不會影響后續PCR反應。

      特征

      • 熱敏性,完美配合一步法試劑使用

      • 有可用于凍干(無甘油)的版本


      實驗例


      左圖,對比其他公司宣稱的熱敏性產品,50℃ 10分鐘處理后,將各UNG酶與含有U的PCR產物混合后37度進行溫育。只有TOYOBO的UNG在50度10分鐘處理后失去活性,沒有分解掉含有U的PCR產物。

      右圖,比較了檢測腸病毒RNA時Ct值。使用TOYOBO的UNG條件時檢測靈敏度沒有問題,使用其他公司的產品時Ct值出現了延遲。



        高性能熱啟動抗體

      (適用于Taq、TTh、TTx等酶)

      anti-Taq high是針對Taq DNA聚合酶的單克隆中和抗體,使用抗體熱啟動法可以有效抑制非特異性擴增,增強PCR的特異性和靈敏度。在進入PCR循環前的預變性階段,Taq酶的活性即被完全激活,使用起來方便快速。此外,可提供用于凍干的無甘油版本。

      特征

      • 可兼容Taq、Tth以及TTx酶,封閉效果好

      • 使用簡便,PCR反應前和聚合酶混合即可實現熱啟動

      • 變性時間短,不影響酶在后續循環中的活性

      • 有可用于凍干(無甘油)的版本


      實驗例


      使用anti-Taq high配制Realtime PCR Master Mix(成品貨號:QPK-201)通過SYBR Green法檢測β-actin基因,測試其熱啟動性能。結果顯示,即使在3個拷貝的低濃度,依然可以維持極佳的檢測能力。


      截至目前,進入我們視野的是不斷增多的確診和疑似病例,堅守在一線的醫務工作者,各交通樞紐的檢疫人員,機構、專家和媒體人士披露的信息。此外還有背后大量的研究人員,產業上下全力以赴,在為病原的鑒別、診斷和治療付出心血。更重要的是,我們每個人都重視起來并參與其中,積極防治,協力抗爭,正確科學地對待這次事件才能讓病毒無處藏身。

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